other تهیه آنتی‌بادی زنجیره سنگین پلی‌کلونال علیه پروتیین انتقال‌دهنده روی SLC39A6 و کاربرد آن در تست‌های تشخیصی مقاله اصیل Original Article <span style="font-family:yekanYW;"><strong><em><span style="font-size:10.0pt;">زمینه و هدف:</span></em></strong><span style="font-size:10.0pt;"> پروتیین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">SLC39A6 (solute carrier family 39)</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> یا </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">LIV-1</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> یک پروتیین انتقال‌دهنده روی می‌باشد که در سرطان‌های استروژن مثبت مانند سرطان سینه بیان بیش‌ازحد دارد. افزایش بیش‌ از حد غلظت روی می‌تواند محرک تقسیم سلولی نامنظم و سرطان و متاستاز شود. بنابراین مهار پروتیین‌های انتقالی روی می‌تواند در درمان سرطان موثر باشد. پروتیین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">LIV-1</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> می‌تواند به‌عنوان یک نشانگر تشخیصی مناسب سرطان نیز در روش‌های آزمایشگاهی مورد استفاده قرار گیرد. مطالعه حاضر جهت تهیه پلی‌کلونال آنتی‌بادی شتری برای شناسایی پروتیین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">LIV-1</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> در سطح سلول صورت گرفته است.</span><br> <strong><em><span style="font-size:10.0pt;">روش بررسی:</span></em></strong> <span style="font-size:10.0pt;">مطالعه پژوهشی حاضر در انستیتو پاستور ایران، از مهر 1397 تا اسفند 1398 انجام شد. در ابتدا سازه ژنی بیانی حاوی </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">LIV-1</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> انسانی تهیه و به باکتری </span><em><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">E.coli</span></span></em><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;"> BL21</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> انتقال داده شد و بیان این پروتیین با </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">IPTG</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> القا شد و سپس به‌وسیله ستون کروماتوگرافی تمایلی، پروتیین نوترکیب تخلیص گردید. سپس حیوان شتر یا استفاده از این پروتیین ایمن‌سازی شد. سرم حیوان ایمن شده جدا گردید و عملکرد پلی‌کلونال آنتی‌بادی در تست‌های تشخیصی الایزا وسترن بلات و فلوسیتومتری در شناسایی پروتیین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">LIV-1</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> مورد ارزیابی قرار گرفت.</span><br> <strong><em><span style="font-size:10.0pt;">یافته‌ها:</span></em></strong> <span style="font-size:10.0pt;">نتایج نشان دادند که پروتیین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">LIV-1</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> به‌خوبی تخلیص شده است و شتر علیه این پروتیین ایمن شده است. با توجه به نتایج، وسترن بلات، الایزا و فلوسایتومتری نشان داده شد این سرم قابلیت اتصال و شناسایی پروتیین </span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;">LIV-1</span></span><span style="font-size:10.0pt;"> را دارا می‌باشد.</span><br> <strong><em><span style="font-size:10.0pt;">نتیجه‌گیری:</span></em></strong> <span style="font-size:10.0pt;">در این پژوهش نشان داده شد که آنتی‌بادی پلی‌کلونال شتری قابلیت استفاده در روش‌های آزمایشگاهی را دارد و می‌تواند برای تست‌های ایمونولوژی و کاربردهای درمانی مورد توجه قرار گیرد.</span><span dir="LTR"><span style="font-size:8.0pt;"></span></span></span> <div><strong><em>Background:</em></strong> SLC39A6 Protein (solute carrier family 39) or LIV-1 is a zinc transporter protein that is overexpressed in positive estrogen cancers such as breast cancer. The LIV-1 protein transfer zinc into the cytoplasm through the plasma membrane. Today it is known that just as a decrease in the concentration of zinc in the cell can cause cancer, an excessive increase in the concentration of zinc can also stimulate irregular cell division and caused cancer. Thus, inhibition of zinc transporter protein may play a role in preventing malignancies and metastasis. It can also be used as a diagnostic marker in the diagnosis of cancers in various laboratory methods. The present study was performed to prepare a polyclonal camel antibody for the detection of LIV-1 protein at the cell surface.<br> <strong><em>Methods:</em></strong> This study was started in the Pasture Institute of Iran in 2018 September and finished in February 2020. An expression construct containing the human LIV-1 gene was prepared and transferred to the <em>E.coli</em> BL21 by chemical (CaCl2) and heat shock method. The expression of the protein was induced by IPTG and then protein was purified by affinity (Ni-NTA) chromatography. After preparing recombinant protein one female camel was immunized, 6 times at two weeks intervals with Freund&#39;s adjuvant. After immunization, the isolated polyclonal antibody was evaluated by ELISA, western blotting and flow cytometry in the detection of LIV-1 protein.</div> <table align="center" cellpadding="0" cellspacing="0" hspace="0" vspace="0"> <tbody> <tr> <td align="left"> <div><strong><em>Results:</em></strong> The result showed that LIV-1 protein was well purified and also the camel polyclonal antibody was able to detect LIV-1 protein in ELISA, western blot and also it can detect LIV-1 on the cell surface as shown by flow cytometry test.<br> <strong><em>Conclusion:</em></strong> In recent years, LIV-1 has been shown to be a good candidate as a marker in breast cancer, so polyclonal antibodies against LIV-1 can be used for early detection of breast cancer by various diagnostic methods. In this study, it has been shown that polyclonal camel antibodies can be used in laboratory methods and can be considered for immunological tests and therapeutic applications. <span dir="RTL"></span></div> </td> </tr> </tbody> </table> <div><div style="clear:both;"></div></div> شتر, آنتی‌بادی زنجیره سنگین, پلی‌کلونال آنتی‌بادی, پروتیین انتقال‌دهنده روی. camel, heavy chain antibody, polyclonal antibody, zinc transporter protein. 274 280 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3666-407&slc_lang=other&sid=1 Hajarossadat Ghaderi هاجرالسادات قادری Yes Department of Biology, Basic Science Unit, Tehran Sciences and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran. گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. Zahra Noormohammadi زهرا نورمحمدی No Department of Biology, Basic Science Unit, Tehran Sciences and Research Branch, Islamic Azad University, Tehran, Iran. گروه زیست‌شناسی، دانشکده علوم پایه، واحد علوم و تحقیقات تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران. Mahdi Habibi-Anbouhi مهدی حبیبی انبوهی No National Cell Bank of Iran, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. بخش بانک سلولی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Fatemeh Kazemi-Lomedasht فاطمه کاظمی لمعه دشت No Biotechnology Research Centre, Venom and Biotherapeutics Molecules Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، آزمایشگاه ونوم و بیومولکول‌های درمانی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. Mahdi Behdani مهدی بهدانی No Biotechnology Research Centre, Venom and Biotherapeutics Molecules Laboratory, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. Zoonosis Research Centre, North Research Center, Pasteur Institute of Iran, Amol, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، آزمایشگاه ونوم و بیومولکول‌های درمانی، انستیتو پاستور ایران، تهران، ایران. مرکز تحقیقات بیماری‌های زئونوز، پژوهشکده شمال کشور، انستیتو پاستور ایران، آمل، ایران.