fa رنگ‌آمیزی فاژ آنتی‌بادی نوترکیب ضد فیمبریه K99 <strong>زمینه و هدف</strong>: آنتی‌بادی‌های نوترکیب نسل جدیدی از آنتی‌بادی‌های مونوکلونال می‌باشند که با روش‌های جدید بیولوژی مولکولی ساخته می‌شوند. این آنتی‌بادی‌ها معمولاً توسط فن‌آوری نمایش بر روی سطح فاژ از کتابخانه‌های فاژی ایمن یا غیر‌ایمن بر علیه آنتی‌ژن مورد نظر جدا می‌گردند و از آنها جهت تشخیص و درمان برخی از بیماری‌ها و همچنین شناسایی تعداد زیادی از آنتی‌ژن‌ها استفاده می‌شود. در موارد تشخیصی، تشکیل کمپلکس آنتی‌بادی آنتی‌ژن بایستی به نحوی ردیابی شود که از روش‌های گوناگونی جهت آشکارسازی آنها استفاده می‌شود. هدف از انجام این تحقیق رنگ‌آمیزی یک فاژ آنتی‌بادی نوترکیب ضد آنتی‌ژن K99 توسط دو رنگ مخصوص رنگ‌آمیزی پروتیین‌ها و سنجش فعالیت فاژ رنگ‌آمیزی شده در تشخیص مستقیم فیمبریه K99 می‌باشد.<p></p> <p dir="rtl"><strong>روش بررسی</strong>: فاژمید وکتور حامل ژن آنتی‌بادی ضد فیمبریه K99 را پس از خالص‌سازی به سلول E. coli سویه TG1 انتقال داده تا این آنتی‌بادی به‌شکلPhage- scFv  بیان گردد. پس از بیان آنتی‌بادی فوق و خالص نمودن آن، با استفاده از رنگ‌های Coomassie brilliant blue و Disperse Red dye 60 اقدام به رنگ‌آمیزی آن نموده و توانایی شناسایی آنتی‌بادی رنگ‌آمیزی شده نسبت به آنتی‌ژن K99 خالص مورد بررسی قرار گرفت.</p> <p dir="rtl"><strong>یافته‌ها</strong>: رنگ‌آمیزی فاژ آنتی‌بادی با هر دو رنگ فوق قابل انجام بوده و آنتی‌بادی مذکور بعد از رنگ‌آمیزی قادر به شناسایی آنتی‌ژن K99 می‌باشد.</p> <p dir="rtl"><strong>نتیجه‌گیری</strong>: می‌توان از رنگ‌های فوق که قابلیت رنگ‌آمیزی پروتیین‌ها را دارند و همچنین باعث تخریب ساختار آن‌ها نمی‌شوند در رنگ‌آمیزی فاژ آنتی‌بادی‌ها بهره جست و از آنها در جهت شناسایی آنتی‌ژن مربوطه استفاده نمود.</p> <p style="text-align: justify"><!--stripped--> Normal 0 false false false EN-US X-NONE AR-SA MicrosoftInternetExplorer4 <!--stripped--><!--stripped--> <!--stripped--><!--stripped--> !mso]> <ob<illegal tag>ject classid="clsid:38481807-CA0E-42D2-BF39-B33AF135CC4D" id=ieooui> </object> <style> st1":*{behavior:url(#ieooui) } </style> <!--stripped--> <!--stripped--> <style> /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable {mso-style-name:"Table Normal" mso-tstyle-rowband-size:0 mso-tstyle-colband-size:0 mso-style-noshow:yes mso-style-priority:99 mso-style-qformat:yes mso-style-parent:"" mso-padding-alt:0in 5.4pt 0in 5.4pt mso-para-margin:0in mso-para-margin-bottom:.0001pt mso-pagination:widow-orphan font-size:11.0pt font-family:"Calibri","sans-serif" mso-ascii-font-family:Calibri mso-ascii-theme-font:minor-latin mso-fareast-font-family:"Times New Roman" mso-fareast-theme-font:minor-fareast mso-hansi-font-family:Calibri mso-hansi-theme-font:minor-latin mso-bidi-font-family:Arial mso-bidi-theme-font:minor-bidi} </style> <!--stripped--> <strong>Background</strong><strong>:</strong> Recombinant antibodies are new versions of monoclonal antibodies that are produced by recent molecular biology techniques. These antibodies can be isolated by phage display technology from immune or non-immune libraries. Recombinant antibodies are applied to treatment of some diseases and also are increasingly used for diagnosis and detection of many antigens. In the latter case, the presence of antigen-antibody complexes has to be detected by further approaches. The aim of current research was to stain an anti-K99 phage antibody with two different protein dyes and to apply them directly for detection of E. coli K99 fimbriae.<br><strong>Methods</strong><strong>:</strong> In order to stain above antibody, a phagmid vector carrying the anti-K99 single-chain Fv (scFv) antibody was isolated, purified and transformed into TG1 strain of E. coli. Afterward, the antibody was expressed in this cell as phage-scFv antibody. Phage antibodies were subsequently eluted, purified and stained with Disperse Red dye 60 and Coomassie Brilliant Blue. Finally, the binding activity of coloured phage antibodies towards the purified K99 fimbriae was verified by immunoblotting. <br><strong>Results</strong><strong>:</strong> The results showed that anti-K99 phage antibody was stained with both dyes and the coloured phages were able to recognize the corresponding antigen. <br><strong>Conclusions:</strong> These protein stains that they usually do not alter the protein structure can be used for staining phage antibodies. The coloured phage antibodies retain their binding affinity for the antigens, and therefore can be applied to detection of relevant antigens.</p> آنتی‌بادی نوترکیب،فاژ،رنگ‌آمیزی،K99 Recombinant,antibody,phage,staining,K99 821 827 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-387&slc_lang=fa&sid=1 Mehdi Golchin مهدی گلچین Yes Fatemeh Noori فاطمه نوری No Ali Akbar Khalili-Yazdi علی‌اکبر خلیلی یزدی No