fa تشخیص میکرومتاستاز با مارکر CEA در نمونه‌های خون محیطی و مغز استخوان افراد مبتلا به سرطان معده با روش Real-Time PCR <p dir="rtl" style="text-align: justify"><!--stripped--> Normal 0 false false false EN-US X-NONE AR-SA MicrosoftInternetExplorer4 <!--stripped--><!--stripped--> <!--stripped--> <!--stripped--> <style> /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable {mso-style-name:"Table Normal" mso-tstyle-rowband-size:0 mso-tstyle-colband-size:0 mso-style-noshow:yes mso-style-priority:99 mso-style-qformat:yes mso-style-parent:"" mso-padding-alt:0in 5.4pt 0in 5.4pt mso-para-margin:0in mso-para-margin-bottom:.0001pt mso-pagination:widow-orphan font-size:11.0pt font-family:"Calibri","sans-serif" mso-ascii-font-family:Calibri mso-ascii-theme-font:minor-latin mso-fareast-font-family:"Times New Roman" mso-fareast-theme-font:minor-fareast mso-hansi-font-family:Calibri mso-hansi-theme-font:minor-latin mso-bidi-font-family:Arial mso-bidi-theme-font:minor-bidi} </style> <!--stripped--><strong>زمینه و هدف</strong>: سرطان معده اولین سرطان بدخیم کشنده در ایران به‌شمار می‌رود. علی‌رغم پیشرفت‌های درمانی جدید برای درمان سرطان معده، گسترش تومور از طریق سیستم گردش خون و مغزاستخوان به اندام‌های دورتر، اصلی‌ترین علت مرگ و میر در این افراد محسوب می‌شود. بنابراین نیاز فوری برای ایجاد روش‌های حساس جهت تشخیص سلول‌های توموری پخش‌شده در خون محیطی (PB) و مغز استخوان (BM) بیماران مبتلا به سرطان معده وجود دارد.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify"><strong>روش بررسی</strong>: در این بررسی آینده‌نگر از Carcino Embryonic Antigen به عنوان تومور مارکر و از Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase به‌عنوان کنترل داخلی برای تشخیص و تعیین مقدار سلول‌های توموری پراکنده شده در نمونه‌های PB و BM 35 فرد مبتلا (نسبت مرد به زن:20 به 15 میانگین سنی: 50 سال محدوده سنی: 75-30) به سرطان معده استفاده شده است. RNA کل از رده سلولی سرطان معده AGS استخراج و قطعات ژنی CEA و GAPDH توسط رونویسی معکوس سنتز شدند. قطعات تکثیر شده به‌طور جداگانه در داخل وکتور pTZ57R/T کلون شدند. سپس کلونینگ دوتایی این قطعات در داخل این وکتور صورت گرفت. از رقت‌های متوالی این پلاسمید برای رسم منحنی استاندارد استفاده شد. نمونه‌های PB و BM از افراد مبتلا به سرطان معده جمع آوری و بعد از سنتز cDNA بر روی آنها Real-Time PCR صورت گرفت.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify"><strong>یافته‌ها</strong>: در این مطالعه، اندازه‌گیری کمی ژن‌های CEA و GAPDH با استفاده از Real-Time PCR با حساسیت بسیار بالا بهینه شد. mRNAی CEA در 23% نمونه‌های PB و 20% نمونه‌های BM افراد مبتلا تشخیص داده شد. در هیچ کدام از نمونه‌های مربوط به گروه کنترل mRNAی CEA تشخیص داده نشد.</p> <p dir="rtl" style="text-align: justify"><strong>نتیجه‌گیری</strong>: quantitative Real-Time PCR برای CEA می‌تواند به عنوان تکنیک مفیدی برای تشخیص میکرومتاستاز در نمونه‌های PB و BM افراد مبتلا به سرطان معده به‌کار رود.</p> <p style="text-align: justify"><!--stripped--> Normal 0 false false false EN-US X-NONE AR-SA MicrosoftInternetExplorer4 <!--stripped--><!--stripped--> <!--stripped--> <!--stripped--> <style> /* Style Definitions */ table.MsoNormalTable {mso-style-name:"Table Normal" mso-tstyle-rowband-size:0 mso-tstyle-colband-size:0 mso-style-noshow:yes mso-style-priority:99 mso-style-qformat:yes mso-style-parent:"" mso-padding-alt:0in 5.4pt 0in 5.4pt mso-para-margin:0in mso-para-margin-bottom:.0001pt mso-pagination:widow-orphan font-size:11.0pt font-family:"Calibri","sans-serif" mso-ascii-font-family:Calibri mso-ascii-theme-font:minor-latin mso-fareast-font-family:"Times New Roman" mso-fareast-theme-font:minor-fareast mso-hansi-font-family:Calibri mso-hansi-theme-font:minor-latin mso-bidi-font-family:Arial mso-bidi-theme-font:minor-bidi} </style> <!--stripped--><!--stripped--> <!--stripped--><!--stripped--> <!--stripped--> <strong>Background</strong><strong>:</strong> Gastric adenocarsinoma is the first leading fatal malignancy in Iran. Despite advances in novel therapeutics approaches for gastric cancer (GC) patient, tumor dissemination via blood stream to distant organ is still the major cause of death. Therefore, there is urgent need to establish sensitive methods for early detection of disseminated tumor cells in peripheral blood (PB) and bone marrow (BM) specimens of gastric cancer patients. <br><strong>Methods</strong><strong>:</strong> In the present study, we use Carcinoma Embryonic Antigen (CEA) as a tumor marker and Glyceraldehyde 3-Phosphate Dehydrogenase (GAPDH) as an internal control to detection and quantification of disseminated tumor cells in PB and BM specimens of affected individuals. Total RNA was extracted from AGS (gastric cancer) cell line and CEA and GAPDH fragments were generated by reverse transcription. The amplified fragments were cloned into pTZ57R/T vector separately. Double cloning of these genes has done into one pTZ57R/T vector. Serial dilution of this recombinant plasmid is used to construct standard curve, each containing a known amount of input copy number. Total RNA was extracted from BP and BM specimens of 35 GC patients. cDNA of the specimens were synthesized by reverse transcription and subjected to Quantitative Real-Time PCR (QRT-PCR).<br><strong>Results</strong><strong>:</strong> We developed a highly sensitive and specific quantitative PCR for CEA and GAPDH using Real-Time PCR based on TaqMan technology. CEA mRNA was detected in 23% of PB and 20% of BM specimens. There was no CEA mRNA detecting in control group.<br><strong>Conclusions:</strong> The QRT-PCR for CEA can be a useful technique for detection of micrometastases in the PB and BM specimens of gastric cancer patients.<br></p> سرطان معده،میکرومتاستاز،آنتی‌ژن کارسینوآمبریونیک،Real،Time PCR Carcino embryonic antigen,gastric,adenocarcinoma,metastasis,PCR 542 548 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-422&slc_lang=fa&sid=1 Dardaei Alghalandis L لیلا دردائی‌القلندیس No Shahsavani R رضا شاهسونی No Ghavamzadeh A اردشیر قوام‌زاده No Behmanesh M مهرداد بهمنش No Aslankoohi E الهام اصلانکوهی No Alimoghadam K کامران علی‌مقدم No Ghaffari SH سیدحمیداله غفاری Yes