fa جداسازی Anti-dsDNA IgG به‌وسیله تست الایزا غیر مستقیم از دو منبع مختلف ds-DNA؛ اشریشیا کلی و تیموس گوساله <p dir="rtl" style="margin: 6pt 0in 0pt direction: rtl unicode-bidi: embed text-align: justify" class="MsoNormal"><strong><span style="font-size: 8pt">زمینه و هدف: </span></strong><span style="font-size: 8pt">آنتی‌بادی‌های علیه </span><span style="font-size: 8pt">dsDNA</span><span style="font-size: 8pt"> به‌صورت فراوان در سرم بیماران لوپوس اریتماتوس سیستمیک وجود دارد امروزه کیت‌های تجاری الایزا از </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt">ها و اتصال‌گرهای مختلف </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> برای جداسازی آنها استفاده می‌کنند.</span><span style="font-size: 8pt"> </span><span style="font-size: 8pt">این مطالعه به‌منظور ارزیابی دو منبع مختلف </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> و نیز دو نوع ماده اتصال‌گر مختلف </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> در سنجش الایزا صورت گرفت. <strong><br></strong></span></p><p dir="rtl" style="margin: 6pt 0in 0pt direction: rtl unicode-bidi: embed text-align: justify" class="MsoNormal"><span style="font-size: 8pt"><strong>روش بررسی: </strong></span><span style="font-size: 8pt">در این مطالعه </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> اشریشیا کلی</span><span style="font-size: 8pt"> (25922</span><span style="font-size: 8pt">ATCC</span><span style="font-size: 8pt">)</span><span style="font-size: 8pt"> و تیموس گوساله را با درجه خلوص بالا استخراج گردید و به‌عنوان آنتی‌ژن جهت کوتینگ و از دو ماد</span><span style="font-size: 8pt">ه</span><span style="font-size: 8pt"> پلی-ال-لیزین و </span><span style="font-size: 8pt">Methylated- BSA</span><span style="font-size: 8pt"> جهت پیش کوتینگ مورد استفاده و ارزیابی قرار گرفتند. جهت تعیین حساسیت و ویژگی از نمونه‌های سرمی از بیماران لوپوس اریتماتوس سیستمیک و </span><span style="font-size: 8pt">افراد سالم</span><span style="font-size: 8pt"> اهدا کننده خون در مقایسه با تست ایمنوفلورسانس </span><span style="font-size: 8pt">(IF)</span><span style="font-size: 8pt"> و کیت تجاری استفاده گردید با استفاده از نرم‌افزار </span><span style="font-size: 8pt">SPSS</span><span style="font-size: 8pt">‌</span><span style="font-size: 8pt"> ویراست 15 و آزمون </span><span style="font-size: 8pt">McNemar</span><span style="font-size: 8pt"> به‌منظور تجزیه و تحلیل داده‌ها استفاده گردید.</span><strong><span style="font-size: 8pt"> <br></span></strong></p><p dir="rtl" style="margin: 6pt 0in 0pt direction: rtl unicode-bidi: embed text-align: justify" class="MsoNormal"><strong><span style="font-size: 8pt"></span></strong><strong><span style="font-size: 8pt">یافته‌ها:</span></strong><span style="font-size: 8pt"> نتایج نشان داد که </span><span style="font-size: 8pt">Methylated- BSA</span><span style="font-size: 8pt"> واکنش غیر اختصاصی بسیار کمتری نسبت به پلی-ال-لیزین دارد همچنین حساسیت و ویژگی الایزا</span><span style="font-size: 8pt"> با</span><span style="font-size: 8pt"> </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> تیموس گوساله در مقایسه با تست ایمنوفلورسنس </span><span style="font-size: 8pt">(IF)</span><span style="font-size: 8pt"> و کیت تجاری الایزا به‌ترتیب 80%، 88% و 100%، 98% به‌دست آمد </span><span style="font-size: 8pt">و</span><span style="font-size: 8pt"> الایزا با </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> اشریشیا کلی در مقایسه با تست ایمنوفلورسنس </span><span style="font-size: 8pt">(IF)</span><span style="font-size: 8pt"> و کیت تجاری الایزا به‌ترتیب 73%، 69%، 85% و 79% به‌دست آمد.</span><strong><span style="font-size: 8pt"> <br></span></strong></p><p dir="rtl" style="margin: 6pt 0in 0pt direction: rtl unicode-bidi: embed text-align: justify" class="MsoNormal"><strong><span style="font-size: 8pt">نتیجه‌گیری: </span></strong><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> تیموس گوساله بالقوه منبع آنتی‌ژن مفیدی جهت جداسازی آنتی‌بادی‌های علیه </span><span style="font-size: 8pt">dsDNA</span><span style="font-size: 8pt"> توسط آزمون الایزا است. همچنین استفاده از </span><span style="font-size: 8pt">Methylated- BSA</span><span style="font-size: 8pt"> می‌تواند نقش موثری در کاهش واکنش‌های غیراختصاصی نسبت به پلی- ال- لیزین داشته باشد.</span></p> <p style="text-align: justify"><strong>Background:</strong><strong> </strong>Anti-dsDNA antibodies frequently found in the sera<strong><em> </em></strong>Systemic Lupus Erythematosus patients, particularly in active disease stage. Nowadays exploit different eukaryotic and prokaryotic dsDNA as antigen source and different reagents as binder. The aim of this study to compared two dsDNA different sources and tow different kinds of reagents for binder in ELISA test.</p> <p style="text-align: justify"><strong>Methods:</strong><strong> </strong>In this study bacterial genomic DNA from E.coli (ATCC 25922) and genomic DNA from calf thymus extracted with high purity and were used as antigens for IgG anti-dsDNA detection by ELISA. To coat dsDNA in microtiter wells, tow different kinds of reagents including methylated -BSA and poly-l-lysine (for pre-coating) are used. Sera from systemic lupus erythematosus patients and from normal blood donors are used to assess sensitivity and specificity of our ELISA test in compared with IF test and commercial kits.</p> <p style="text-align: justify"><strong>Results:</strong><strong> </strong>Our results displayed pre-coating of microtiter plates with methylated -BSA reduce nonspecific binding reaction and the relative sensitivity and specificity of ELISA increased when calf thymus DNA is employed as antigenic source in compared with IF test and commercial kits 80%, 88% and 100%, 98% respectively, but when E.coli DNA is used 73%, 69% and 85%, 79%, respectively.</p> <p style="text-align: justify"><strong>Conclusion: </strong>The genomic DNA from calf thymus is a potentially useful source of antigen for detection of anti-dsDNA by ELISA. Also the use of methylatted- BSA could have an effective role in reducing of nonspecific binding reactions.</p> لوپوس اریتماتوس سیستمیک،آنتی‌بادی‌های علیه DNA،الایزا Systemic lupus erythematosus,anti-DNA antibodies,ELISA 25 32 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-491&slc_lang=fa&sid=1 Mohammadi M محسن محمدی Yes Mirjalili A علی میرجلیلی No Habibi Gh غلام رضا حبیبی No Falahi Sh شیرزاد فلاحی No Sarafnejad A عبدالفتاح صراف نژاد No Eatemadi A افشار اعتمادی No Boutorabi SM سید مهدی بوترابی No