fa بررسی مهار رگزایی به وسیله فیوژن پروتئین GST-PAP <a name="OLE_LINK4"><strong><span style="font-size: 8pt">زمینه و هدف</span></strong></a><strong><span style="font-size: 8pt">:</span></strong><span style="font-size: 8pt"> سلول‏های سرطانی برای رشد و تقسیم به غذا نیازمندند. بنابراین برای درمان سرطان یکی از روش‏های مهم و امیدوار کننده استفاده از مهارکننده‏های رگزایی است که رشد تومور و متاستاز سلول‏های سرطانی را متوقف می‏کنند. مطالعات قبلی نشان می‏دهد که </span><span style="font-size: 8pt">Plasminogen related protein-B</span><span style="font-size: 8pt"> دارای اثرات ضد توموری است. با توجه به شباهت این پپتید با </span><span style="font-size: 8pt">Preactivation peptide</span><span style="font-size: 8pt"> پلاسمینوژن (</span><span style="font-size: 8pt">PAP</span><span style="font-size: 8pt">)، اثرات ضد رگزایی</span><span style="font-size: 8pt">PAP </span><span style="font-size: 8pt"><span> </span>در مدلی آزمایشگاهی مورد مطالعه قرار گرفت. <strong><br>روش بررسی:</strong> قطعه  </span><span style="font-size: 8pt">DNA</span><span style="font-size: 8pt"> بیان‌کننده </span><span style="font-size: 8pt">PAP</span><span style="font-size: 8pt"> به کمک </span><span style="font-size: 8pt">PCR</span><span style="font-size: 8pt"> از ژن پلاسمینوژن انسانی در حامل </span><span style="font-size: 8pt">pGEX-2T</span><span style="font-size: 8pt"> همسانه</span><span style="font-size: 8pt">‌</span><span style="font-size: 8pt">سازی شد و در باکتری </span><span style="font-size: 8pt">Escherichia coli</span><span style="font-size: 8pt"> به صورت متصل با </span><span style="font-size: 8pt">GST</span><span style="font-size: 8pt"> (</span><span style="font-size: 8pt">Glutathione S-transferase</span><span style="font-size: 8pt">) بیان گردید، سپس</span><span style="font-size: 8pt">Refolding </span><span style="font-size: 8pt"><span> </span>پروتئین حاصل (</span><span style="font-size: 8pt">GST-PAP</span><span style="font-size: 8pt">) انجام گرفت و پروتئین مذکور با رزین</span><span style="font-size: 8pt">GSH-Sepharose </span><span style="font-size: 8pt"><span> </span>تخلیص </span><span style="font-size: 8pt">شد</span><span style="font-size: 8pt"> و روی یک مدل رگزایی با استفاده از ماتریژل بررسی گردید. <br><strong>یافته ‏ها</strong></span><span style="font-size: 8pt">:</span><span style="font-size: 8pt"> پس از تایید صحت پروتئین خالص شده با روش‏های </span><span style="font-size: 8pt"><br>SDS-PAGE</span><span style="font-size: 8pt"> و ایمنوبلاتینگ، بر اساس نتایج حاصل از سنجش رگزایی در سیستم ماتریژل مشخص شد که </span><span style="font-size: 8pt">GST-PAP</span><span style="font-size: 8pt"> رگزایی را متوقف و مهار می‏کند. طبق این اطلاعات همبستگی بسیاری بین غلظت اعمال شده از </span><span style="font-size: 8pt">GST-PAP</span><span style="font-size: 8pt"> و مهار رگزایی وجود دارد که به صورت کاهش طول ساختارهای مویرگی شکل و تعداد توبول‏ها مشخص می‏شود. مهار رگزایی در غلظت‌های بالای 25 میکروگرم در میلی‌لیتر نسبت به کنترل معنی‏دار هستند. <br><strong>نتیجه‌گیری:</strong> براساس یافته‌های این مطالعه<br> </span><span style="font-size: 8pt">GST-PAP</span><span style="font-size: 8pt"> در سیستم ماتریژل توانایی مهار تشکیل شبکه سلول‏های آندوتلیال‏ را داراست. این نتایج می‏تواند تاییدی برای فرضیه مهار رگزایی توسط </span><span style="font-size: 8pt">PAP</span><span style="font-size: 8pt"> باشد. لذا این پپتید می‏تواند نامزدی برای مهار رگزایی محسوب شود.</span><p></p> <p style="text-align: justify"><strong>Background</strong><strong>:</strong> Tumor cells need food and oxygen supply for growth and division. Therefore one of the most promising areas of cancer therapy focuses on using agents that inhibit tumor angiogenesis. Inhibition of angiogenesis prevents cell growth, division and metastasis. Previous studies showed that plasminogen related Protein-B has an anti-tumor activity in mice. This protein has a high level of homology with preactivation Peptide (PAP) of human plasminogen. According to this high homology, antiangiogeneic activity of PAP was investigated in an in vitro angiogenesis model.</p> <p style="text-align: justify"><strong>Methods</strong>: PAP encoding region of human plasminogen gene was isolated by Polymerase Chain Reaction and ‎cloned in pGEX-2T vector. This plasmid was expressed in Escherichia coli as a fusion protein (GST-PAP). ‎GST-PAP was expressed as inclusion body and purified by affinity chromatography on GSH-sepharose ‎resin after refolding. antiangiogenic effects of purified protein were surveyed with Matrigel assay‏.‏‎ ‎</p> <p style="text-align: justify"><strong>Results</strong>: The GST-PAP was expressed and purified and its accuracy was confirmed by SDS-PAGE analysis ‎and immunoblotting. Microscopic studies showed that GST-PAP inhibited angiogenesis in Matrigel system ‎which is shown by shrinking the length of capillary like structures and a decrease in the number of tubule. ‎While applying concentarations of 25μg/ml of GST-PAP and concentrations above that, antiangiogenic ‎activity of GST-PAP was significant comparing to the controls. ‎</p> <p style="text-align: justify"><strong>Conclusion</strong>: Finding shows that GST-PAP can inhibit network formation in Matrigel system. This findings ‎support the theory that PAP is a potent angiogenesis inhibitor.‎</p> پلاسمینوژن،Preactivation،peptide،رگزایی، پروتئین Plasminogen,Peptide,angiogenesis,protein,expression 697 703 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-527&slc_lang=fa&sid=1 Gharaati MR محمدرضا قرائتی No Mirshahi M منوچهر میرشاهی Yes Sadeghi-Zadeh M مجید صادقی‌زاده No