fa بررسی میزان بیان ژن‌های Fas و Apaf-1 در فیبروبلاست‌های پوست بیماران مبتلا به اﺳﮑﻠﺮوز ﺳﯿﺴﺘﻤﯿﮏ مقاله اصیل Original Article <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong><em>زمینه و هدف</em></strong>: در اسکلروز سیستمیک، فیبروبلاست‌ها در برابر آپوپتوز مقاوم شده و با ترشح مداوم کلاژن و ماتریکس خارج سلولی، موجب تشکیل فیبروز در بافت‌ها می‌شوند. لازم است علل ثانویه بروز بیماری، از جمله عدم پاسخ فیبروبلاست‌های فعال شده به آپوپتوز به عنوان عامل اصلی در ایجاد و استقرار بیماری، مورد توجه قرار گیرد. مطالعه حاضر با هدف بررسی میزان بیان نسبی دو ژن کلیدی مسیر آپوپتوز، <span dir="LTR">Fas</span> و <span dir="LTR">Apaf-1</span> که به ترتیب در مسیرهای خارجی و داخلی آپوپتوز نقش دارند، انجام شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong><em>روش بررسی: </em></strong>در این مطالعه مورد- شاهدی، نمونه‌های بیوپسی پوست از 19 بیمار مبتلا به اسکلروز سیستمیک منتشر و 16 فرد سالم در بازه زمانی سال 1393 تا 1394جمع‌آوری شد. گروه بیمار از درمانگاه روماتولوژی بیمارستان شریعتی و مرکز روماتیسم ایران و گروه کنترل از پرسنل بیمارستان شریعتی انتخاب شدند. پس از جداسازی و کشت فیبروبلاست‌های پوستی، <span dir="LTR">RNA</span> سلول‌ها استخراج گردید و سنتز <span dir="LTR">cDNA</span> از روی این رونوشت‌های ژنومی انجام گرفت. سپس میزان بیان ژن‌های <span dir="LTR">Fas</span> و <span dir="LTR">Apaf-1</span> توسط واکنش <span dir="LTR">Real-time PCR</span> اندازه‌گیری شد.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong><em>یافته‌ها:</em></strong> تجزیه و تحلیل داده‌های به‌دست آمده از <span dir="LTR">Real-time PCR</span> نشان داد که در فیبروبلاست پوست بیماران مبتلا به اسکلروز سیستمیک و افراد سالم تفاوت معنا‌داری از نظر میزان بیان ژن‌های (8/0<span dir="LTR">P=</span>)<span dir="LTR">Fas</span> &nbsp;و (17/0<span dir="LTR">P=</span>)<span dir="LTR">Apaf-1</span> &nbsp;وجود نداشت.</p> <p dir="RTL" style="text-align: justify;"><strong><em>نتیجه‌گیری: </em></strong>در این مطالعه تغییرات معنادار در میزان بیان ژن‌های <span dir="LTR">Apaf-1</span> و <span dir="LTR">Fas</span> وجود نداشت و این موضوع نشان‌ می‌دهد که حداقل در سطح <span dir="LTR">mRNA</span> این ژن‌ها در فیبروبلاست‌های بیماران اسکلروز سیستمیک فعال نشده‌اند.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Background</em></strong><strong>:</strong> Systemic sclerosis (SSc) is an autoimmune rheumatic connective tissue disease. In normal wound healing process, fibroblasts are activated, proliferated and involved in tissue repair, and then removed by apoptosis. In systemic sclerosis, patient&rsquo;s fibrosis occurs when fibroblasts become resistant to apoptosis and secrete a large amount of collagen and other extracellular matrixes. As the primary causes the disease are very complex and often unknown, it is necessary to consider or target the secondary causes of disease, such as the unresponsiveness of activated fibroblasts to apoptosis as the major factor in the creation and deployment of illness. In this study, we examined the expression levels of two key pro-apoptotic genes, Fas and Apaf-1, which are respectively involved in external and internal pathway of apoptosis.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Methods</em></strong><strong>:</strong> In a case-control study skin biopsy samples were obtained from 19 patients with diffuse SSc, and 16 healthy controls. Dermal fibroblasts were cultured and total RNA was isolated from cell populations using High Pure RNA Isolation Kit (Roche Applied Science, Mannheim, Germany), followed by cDNA synthesis using RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit (Thermo Fisher Scientific Inc., Massachusetts, USA). Real-time PCR was performed using SYBRGreen gene expression master mix (Takara Shuzo, Co., Ltd, Shiga, Japan) and specific primers for Fas and Apaf-1. Real-time data were analyzed using the (2^-&Delta;CT)&times;1000 method. Statistical analysis was accomplished by using the SPSS software, v22 (IBM, Armonk, NY, USA). The P value less than 0.05 were recognized as a significant threshold. All data are represented as the mean &plusmn; SEM.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Results</em></strong><strong>:</strong> Our results showed no significant difference in Fas (P=0.8) and Apaf-1 (P=0.17) mRNA expression levels between skin fibroblasts of systemic sclerosis patients and healthy controls.</p> <p style="text-align: justify;"><strong><em>Conclusion:</em></strong> In this study we observed no significant change in Apaf-1 and Fas mRNA levels in systemic sclerosis fibroblasts compared to control group. Hence, Apaf-1 and Fas are not transcriptionally activated in SSc fibroblasts. Further studies need to take place on protein levels and function of these proteins to confirm the mRNA transcription results.</p> مطالعات مورد- شاهدی, اسکلروز سیستمیک, فیبروبلاست Apaf-1, case-control studies, Fas, fibroblast, systemic sclerosis 282 288 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2308-1&slc_lang=fa&sid=1 Majid Abed Khojasteh مجید عابد خجسته Yes Department of Immunology, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. گروه ایمنی‌شناسی، دانشکده‌ پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران. Fereshteh Alsahebfosoul فرشته‌ آل‌ صاحب ‌فصول No Department of Immunology, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. گروه ایمنی‌شناسی، دانشکده‌ پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران. Mahdi Mahmoudi مهدی محمودی No Rheumatology Research Center, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات روماتولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Mohammad Bagher Mahmoudi محمد باقر محمودی No Department of Genetics, Faculty of Medicine, Shahid Sadoughi University of Medical Sciences, Yazd, Iran. گروه ژنتیک پزشکی، دانشگاه علوم پژشکی شهید صدوقی یزد، یزد، ایران. Shayan Mostafaei شایان مصطفایی No Department of Biostatistics, Faculty of Medical Sciences, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran. گروه آمار زیستی، دانشکده علوم پزشکی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران. Mazdak Ganjalikhani-hakemi مزدک گنجعلی خانی حاکمی No Department of Immunology, Faculty of Medicine, Isfahan University of Medical Sciences, Isfahan, Iran. گروه ایمنی‌شناسی، دانشکده‌ پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی اصفهان، اصفهان، ایران. Farhad Gharibdoost فرهاد غریب‌دوست rrclab@tums.ac.ir No Rheumatology Research Center, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات روماتولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.