Tehran University Medical Journal

fa شناسایی سویه‌های توکسین‌زای گونه‌های گروه باسیلوس سرئوس در شیر خشک نوزادان با استفاده از روش واکنش زنجیره‌ای پلیمراز Detection of toxigenic bacillus cereus strains in powdered infant formula (PIF) milk by PCR assay مقاله اصیل Original Article زمینه و هدف: تغییر شیوه تغذیه نوزادان در سال‌های اخیر و روند رو به رشد استفاده از شیر خشک در آن‌ها باعث اهمیت بیشتر به کیفیت شیر خشک‌های مصرفی و ارزیابی سلامت در آن‌ها شده است. هدف از این پژوهش شناسایی سویه‌های توکسین‌زای گونه‌های گروه باسیلوس سرئوس در شیر خشک نوزادان با استفاده از روش واکنش زنجیره&rlm;ای پلیمراز بوده است. روش بررسی: در این مطالعه مقطعی که در طی ۱۲ ماه از فروردین تا اسفند سال ۱۳۹۴ در آزمایشگاه میکروب‌شناسی مواد غذایی دانشکده بهداشت صورت گرفت، از ۱۲۵ نمونه شیر خشک نوزادان پس از تهیه رقت ۰/۱ بر روی محیط اختصاصی باسیلوس سرئوس (Mannitol Egg Yolk Polymyxin Agar, MYP Agar) تلقیح شد و پس از گرمخانه‌گذاری به مدت ۲۴ ساعت در C° ۳۰، کلنی‌های ظاهر شده از نظر واکنش‌های بیوشیمیایی بر اساس روش‌های استاندارد مورد ارزیابی قرار گرفتند. برای تایید نهایی باسیلوس‌ها و بررسی توکسین‌های این باکتری، واکنش زنجیره‌ای پلیمراز برای ژن‌های انتخابی ITS تایید کننده باسیلوس و NHE مرتبط با اسهال و EM مرتبط با استفراغ انجام شد. یافته‌ها: از ۱۲۵ نمونه شیر خشک نوزادان، ۸۴ نمونه (۶۷/۲%) آلوده و تعداد ۱۱۰ جدایه با روش فنوتیپی، مشکوک به گروه باسیلوس به‌دست آمد. با مطالعه ژنITS ، ۹۱/۸% از جدایه‌ها باسیلوس سرئوس شناسایی شد. ۵۳/۶۳% این باکتری‌ها دارای ژن‌های NHE عامل سندرم اسهالی و ۷۹% دارای ژن EM عامل سندرم استفراغی در باسیلوس سرئوس بودند. نتیجه‌گیری: داده&rlm;های این مطالعه نشان داد که نزدیک به ۸۰% از جدایه‌های باسیلوس سرئوس دارای ژن&rlm; مرتبط با استفراغ هستند و بیان&rlm;کننده قدرت بیماری‌زایی بالای این سویه&rlm;ها است. وجود حتی تعداد اندک این سویه&rlm;های بیماری‌زا یعنی کمتر از میزان مجاز تعریف شده در مواد غذایی، می‌تواند مشکل&rlm;ساز باشد.  Background: In recent years, use of powdered infant formula (PIF) milk for neonates feed is increasing; therefore, the quality control (QC) of PIF products is very important. The aim of present study was detection of toxigenic Bacillus cereus species in PIF milk using PCR assay. Methods: The cross-sectional study was carried out on 125 samples of powdered infant formula milk (PIF) purchased between March 2015 and April 2016 in Department of Pathobiology, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. Briefly, 0.1 dilutions were prepared and inoculated on Bacillus cereus selective media (MYP) and incubated at 30 °C for 24 hours. The suspicious colonies were verified using biochemical tests based on standard methods. Final confirmation of studied isolates was carried out by ITS gene detection using polymerase chain reaction (PCR) assay. Presence of nonhemolytic enterotoxin (NHE) (linked to diarrhoea syndrome) and emetic toxin (EM) (linked to emetic syndrome) virulence genes were investigated using polymerase chain reaction assay.  <table align="center" cellpadding="0" cellspacing="0" hspace="0" vspace="0"> <tbody> <tr> <td align="left"> Results: In this study, of 125 PIF samples, 84 (67.2%) were contaminated. Of various recovered bacteria from these samples, 110 bacterial isolates were suspected to be Bacillus spp. using phenotypic methods. The ITS PCR results showed that 91.8% of the isolates were B. cereus. Respectively, 53.63 and 79% of B. cereus isolates possessed NHE and EM virulence genes. </td> </tr> </tbody> </table> <div style="clear: both; text-align: justify;"></div> Conclusion: Our data revealed that near 80% of Bacillus cereus isolates have emetic toxin (EM) gene, as result virulence potency of this isolates is very high. However, the low number of this organisms in foods is very important and food safety protocols for these opportunistic toxigenic bacteria should be revised. Since the pasteurization process is ineffective on B. cereus spores; therefore, spores can remain in PIF milk and the vegetative bacterial cells can cause food poisoning in neonates. Therefore, modification of foods quality control protocols is essential in order to identify virulence genes in this bacterium. مطالعه توصیفی مقطعی, شیر خشک, باسیلوس سرئوس, نوزادان, روش مولکولی, واکنش زنجیره‌ای پلیمراز, ویرولانس bacillus cereus, cross-sectional studies, infants, infant formula, molecular method, polymerase chain reaction, virulence 179 186 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-25-5574&slc_lang=fa&sid=1 Mohammad Mehdi Soltan Dallal محمد مهدی سلطان دلال msoltandallal@gmail.com Yes Department of Pathobiology, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. Food Microbiology Research Center, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. مرکز تحقیقات میکروبیولوژی مواد غذایی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Shirin Nezamabadi شیرین نظام‌آبادی No Department of Pathobiology, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. Food and Hygiene Control Laboratory, Deputy of Food and Drug, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه پاتوبیولوژی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Jalal Mardaneh جلال مردانه No Department of Microbiology, School of Medicine, Gonabad University of Medical Sciences, Gonabad, Iran. گروه میکروبیولوژی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گناباد، گناباد، ایران. Zahra Rajabi زهرا رجبی No Food Microbiology Research Center, School of Public Health, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. مرکز تحقیقات میکروبیولوژی مواد غذایی، دانشکده بهداشت، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران. Abolfazl Sirdani ابوالفضل سیردانی No Food and Hygiene Control Laboratory, Deputy of Food and Drug, Tehran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. آزمایشگاه کنترل مواد غذایی و بهداشتی، معاونت غذا و دارو، دانشگاه علوم پزشکی تهران، تهران، ایران.