fa تخلیص پروتیین نوترکیب هماگلوتینین (HA1) ویروس آنفلوانزا سویه (A(H1N1 و تولید آنتی‌بادی پلی‌کلونال علیه آن مقاله اصیل Original Article <div style="text-align: justify;"><span style="font-family:yekanyw;"><strong><span style="font-size: 10pt;">زمینه و هدف:</span></strong> <span style="font-size: 10pt;">سال‌های اخیر ویروس آنفلوانزا نوع </span><span dir="LTR"><span data-select-link-text="1" style="font-size: 8pt;">(H1N1) A</span></span><span style="font-size: 10pt;"> باعث عفونت‌های متوسط تا شدید با میزان پراکندگی وسیع در سرتاسر دنیا شده است. بنابراین تشخیص افتراقی، سریع و ارزان قیمت بر پایه شناسایی آنتی&rlm;ژن‌ها دارای اهمیت است. همچنین تولید آنتی&rlm;بادی اختصاصی علیه آنتی&rlm;ژن‌های آنفلوانزا برای موفقیت در تحقیقات پایه و پشرفته ضروری است. هماگلوتینین مهمترین گلیکوپروتیین سطحی ویروس آنفلوانزا است که به دو زیرواحد هماگلوتینین ۱ و هماگلوتینین ۲ شکسته می‌شود. از آن‌جایی که بیشتر مناطق آنتی&rlm;ژنی در ناحیه هماگلوتینین ۱ قرار دارند، بهره‌گیری از &rlm;این دومین به‌عنوان آنتی&rlm;ژن، جهت تولید آنتی&rlm;بادی در این پژوهش مورد مطالعه قرارگرفت.</span><br> <strong><span style="font-size: 10pt;">روش بررسی: </span></strong><span style="font-size: 10pt;">پروتیین نوترکیب هماگلوتینین ۱ در پژوهشی تجربی با همکاری بخش آنفلوانزا انستیتو پاستور ایران در نیمه دوم سال ۱۳۹۳ بیان و تخلیص شد. در ادامه آنتی&rlm;بادی پلی&rlm;کلونال خرگوشی علیه آن در تابستان ۱۳۹۴ تولید شد. پروتیین هماگلوتینین ۱ آنفلوانزا </span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;">(A/PR/8/34)</span></span><span style="font-size: 10pt;"> در وکتور </span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;">pET28aHA1</span></span><span style="font-size: 10pt;"> در میزبان پروکاریتی ایشرشیاکلی </span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;">BL21</span></span><span style="font-size: 10pt;"> در مقیاس زیاد بیان شد. با تغییر پارامترهایی مانند غلظت </span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;">IPTG</span></span><span style="font-size: 10pt;">، زمان القاء و دمای بیان، بهینه‌سازی بیان صورت گرفت. سپس پروتیین با استفاده از ستون کروماتوگرافی تمایلی نیکل تخلیص شد.</span><br> <strong><span style="font-size: 10pt;">یافته‌ها:</span></strong> <span style="font-size: 10pt;">تولید آنتی&rlm;بادی&rlm; پلی&rlm;کلونال علیه این پروتیین نوترکیب پس از تزریق آنتی&rlm;ژن به‌همراه ادجوانت فروند بر اساس پروتکلی مشخص، در خرگوش انجام گرفت. همچنین کارایی سرم حاوی این آنتی&rlm;بادی با استفاده از روش </span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;">ELISA</span></span><span style="font-size: 10pt;"> ارزیابی شد. تعیین میزان آنتی&rlm;بادی در سرم خون‌های جمع‌آوری شده از خرگوش با استفاده از الایزا مبتنی بر سرم، افزایش آنتی&rlm;بادی اختصاصی را طی دوره ایمیونیزاسیون نشان داد.</span><br> <strong><span style="font-size: 10pt;">نتیجه‌گیری: </span></strong><span style="font-size: 10pt;">با توجه به داده‌ها مشاهده می‌شود این آنتی&rlm;بادی پلی&rlm;کلونال ظرفیت تولید در خرگوش را داراست و می‌تواند در آینده در تست‌های تشخیص آنفلوانزا به مثابه سایر تست‌های ایمنی مانند وسترن بلات، ایمونوسیتوشیمی و ایمونوهیستوشیمی مورد استفاده قرار گیرد.</span></span></div> <div></div><div></div> <div style="text-align: justify;"><strong>Background: </strong>Each year, Human influenza A (H1N1) virus causes moderate to severe infections with a high prevalence throughout the world. Accordingly, the rapid, sensitive and cost-effective laboratory diagnosis based on viral antigen detection is important. Moreover, the generation of specific antibodies directed against Influenza antigens is essential to the success of both basic and applied research programs. Hemagglutinin (HA) is the major surface envelope glycoprotein of influenza virus, which is subsequently cleaved into two subunits, HA1 and HA2. Since most antigenic sites are in the HA1 domain of HA, HA1 domain of influenza virus was studied as antigen to produce polyclonal antibody.<br> <strong>Methods: </strong>In this experimental study we expressed and purified the recombinant HA1 protein in the second half of 2015 at department of influenza and other respiratory viruses, Pasteur Institute of Iran and then prepared the polyclonal rabbit antibody against it. The vector of pET28aHA1 expressing HA1-His tagged protein of H1N1 influenza A/PR/8/34 virus was used for large scale production of HA1 into E. Coli (BL21). By changing expression conditions such as IPTG (Isopropyl &beta;-D-1-thiogalactopyranoside) concentration, time and temperature of incubation, the expression conditions for HA1 were optimized. The total cell protein harvested and purified by nickel affinity chromatography. All above mentioned experiments monitored by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE).<br> <strong>Results: </strong>The efficiency of HA1 recombinant protein was high, equal to 400-600 mg/ml of cell lysate. The polyclonal antibody was prepared by immunizing the rabbits using recombinant HA1 with Freund&rsquo;s adjuvant according to standard protocols. Efficiency of the antiserum evaluated by enzyme linked immunosorbent assay (ELISA). Determination of antibody level in the collected antiserum using serum-based ELISA showed that the specific antibody has risen well through the immunization schedule.<br> <strong>Conclusion: </strong>Our data shows that this polyclonal antibody has potential to be produced in rabbit. It will also be used in the future in influenza diagnosis as well as in other immunological applications such as western blot analyses, immunocytochemistry, and immunohistochemistry.<br> &nbsp;</div> <div></div> آنتی‌بادی, ویروس آنفلوانزا انسانی, هماگلوتینین, پروتیین HA1, پلی‌کلونال antibody, human influenza virus, hemagglutinin, HA1 protein, polyclonal 585 592 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2535-2&slc_lang=fa&sid=1 Fateme Khosravi Node فاطمه خسروی نوده No Research Center of Bioscience and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran. Department of Influenza Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. بخش آنفلوانزا و سایر ویروس‌های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران. Farida Behzadian فریدا بهزادیان No Research Center of Bioscience and Biotechnology, Malek- Ashtar University of Technology, Tehran, Iran. پژوهشکده علوم و فناوری زیستی، دانشگاه صنعتی مالک اشتر، تهران، ایران. Vahideh Mazaheri وحیده مظاهری No Department of Influenza Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. بخش آنفلوانزا و سایر ویروس‌های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران. Hadiseh Shokouhi حدیثه شکوهی No Department of Influenza Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. بخش آنفلوانزا و سایر ویروس‌های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران. Maryam Saleh مریم صالح No Department of Influenza Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. بخش آنفلوانزا و سایر ویروس‌های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران. Behrokh Farahmand بهرخ فرهمند b_farahmand@pasteur.ac.ir Yes Department of Influenza Research and Other Respiratory Viruses, Pasteur Institute of Iran, Tehran, Iran. بخش آنفلوانزا و سایر ویروس‌های تنفسی، انستیتو پاستور تهران، تهران، ایران.