Tehran University Medical Journal

other مقایسه روش‌های MTT، تریپان‌بلو و سنجش کلونوژنیک در تعیین بقای رده سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک انسانی Comparison of MTT, trypan blue, and clonogenic assay, to determine the viability in human anaplastic thyroid cancer cell line مقاله اصیل Original Article <div style="text-align: justify;">زمینه و هدف: ارزیابی بقای سلولی در مطالعات دارویی و سرطان برای تعیین حساسیت سلولی مهم و تعیین‌کننده نتیجه درمان است. بنابراین روش‌های مختلفی استفاده می‌گردد که نقطه پایانی متفاوتی را ارزیابی می‌کنند. تعیین وجود همبستگی بین روش‌ها دارای اهمیت می‌باشد. در این مطالعه، حساسیت روش‌های رنگ‌سنجی ۳-(۴و۵-دی متیل تیازول-۲-ایل)-۲و۵-دی فنیل تترازولیوم برماید (MTT)، تریپان‌بلو و سنجش کلونوژنیک در تعیین بقای رده سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک ارزیابی گردید. روش بررسی: مطالعه تجربی کنونی از مهر تا اسفند ۱۳۹۵ در مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی دانشگاه علوم پزشکی گیلان انجام پذیرفت. رده سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک انسانی کشت شده در محیط Dulbecco;s modified Eagle;s medium (DMEM) حاوی ۱۰% Fetal bovine serum (FBS)، به‌مدت ۲۴ ساعت با ملاتونین تیمار گردید، سپس بقای سلولی توسط تست‌های MTT، تریپان‌بلو و سنجش کلونوژنیک بررسی و از راندمان کشت و درصد کسر بقا جهت رسم منحنی بقا در سنجش کلونوژنیک استفاده گردید. یافته‌ها: غلظت ملاتونین در نقطه IC50 در روش‌های MTT، تریپان‌بلو و سنجش کلونوژنیک به‌ترتیب، شامل ۰/۱۱۷±۴/۷۹۴، ۰/۸۹۴±۴/۳۷۵ و ۰/۳۲۶±۲/۲۴۶ میلی‌مولار بود که مقایسه مقادیر IC50 در آزمون MTT و تریپان‌بلو اختلاف معناداری را نشان نداده (۰/۶۴۴۶P=)، در‌حالی‌که بین MTT-سنجش کلونوژنیک (۰/۰۰۳۲P=)، تریپان‌بلو-سنجش کلونوژنیک (۰/۰۰۷۸P=) اختلاف معنادار بود. نتایج تحلیل رگرسیون بقای سلولی، نشان‌دهنده همبستگی خطی، مثبت و معنادار بین روش‌ها بوده که بین روش‌های MTT و تریپان‌بلو همبستگی بیشتر بود (۰/۹۹r=، ۰/۰۰۱P<).</div> <div style="text-align: justify;">نتیجه‌گیری: نتایج نشان دادند، هر سه روش برای تعیین سمیّت سلولی سرطان تیرویید آناپلاستیک مؤثر بوده و روش‌های MTT و تریپان‌بلو نسبت به سنجش کلونوژنیک، حساسیت بالاتری دارند.</div> <div data-select-like-a-boss="1" style="text-align: justify;">Background: Evaluation of cell viability is momentous in pharmacologic and oncological research. Cell viability evaluation determines cell sensitivity and consequently treatment outcome. Various methods are available to determine cell survival. Each of these methods evaluates different endpoints. Accordingly, determining the correlation between these methods is important. In this study, in order to determine the viability of human anaplastic thyroid cancer cell line, the sensitivity of MTT [3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide] assay, trypan blue test and clonogenic assay were compared. Methods: This experimental study was performed in the Cellular and Molecular Research Center at Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran from October 2016 to March 2017. The human anaplastic thyroid cancer cell line was cultured in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) with 10% fetal bovine serum (FBS). The cultured cells were treated with melatonin, for 24 hours. Then, the viability of the cells was evaluated by MTT assay, trypan blue test and clonogenic assay. Furthermore, plating efficiency and surviving fraction were used in order to draw survival curve in the clonogenic assay. Results: The concentration of melatonin at IC50 point was 4.794±0.117 millimolar (mM) in MTT assay, 4.375±0.894 mM in trypan blue test and 2.246±0.326 mM in clonogenic assay. Comparing the IC50 values of these test revealed that C50 values obtained from MTT assay and trypan blue test had no significant difference (P=0.6446), while there was a significant difference between IC50 values obtained from MTT and clonogenic assays (P=0.0032). Moreover, the IC50 values obtained from trypan blue test and clonogenic assay were also significantly different (P=0.0078). The results of the regression analysis of cell viability were shown a linear, positive and significant correlation between these three methods and MTT assay and trypan blue test showed higher correlation (r=0.99, P<0.001). Conclusion: Based on our results, all these methods were effective to identify cytotoxicity in human anaplastic thyroid cancer cell line, while MTT assay and trypan blue test were more sensitive than clonogenic assay.</div> بقای سلولی, سنجش واحد کلونی‌زایی, ملاتونین, فورمازان MTT, کارسینومای تیرویید, تریپان‌بلو cell survival, colony-forming units assay, melatonin, MTT formazan, thyroid carcinoma, trypan blue 26 32 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-3373-2&slc_lang=other&sid=1 Marjan Ghorbani-Anarkooli مرجان قربانی انارکولی No Department of Anatomical Sciences, School of Medicine, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran. گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گیلان، رشت، ایران. Sara Dabirian سارا دبیریان No Department of Pharmaceutical Biotechnology, School of Pharmacy, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran. گروه بیوتکنولوژی دارویی، دانشکده داروسازی، دانشگاه علوم پزشکی گیلان، رشت، ایران. Hasan Moladoust حسن مولادوست No Department of Biochemistry and Medical Physics, School of Medicine, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran. گروه بیوشیمی و فیزیک پزشکی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گیلان، رشت، ایران. Adib Zendedel ادیب زنده دل No Department of Anatomical Sciences, School of Medicine, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran. گروه علوم تشریح، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گیلان، رشت، ایران. Mohammad Hadi Bahadori محمد هادی بهادری bahadori.mh@gmail.com Yes Cellular and Molecular Research Center, School of Medicine, Guilan University of Medical Sciences, Rasht, Iran. مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی گیلان، رشت، ایران.