Tehran University Medical Journal

other مطالعه اثر microRNA-125 بر بیان ژن‌ مولکول چسبان اینتگرین بتا 2 و میزان چسبندگی سلول‌های اندوتلیال ایزوله‌شده از آئورت به مونوسیت انسان The effect of microRNA-125 on the adhesion molecule expression of integrin beta2 and adhesive determination of endothelial cells isolated from human aorta to monocyte مقاله اصیل Original Article <div style="text-align: justify;">زمینه و هدف: پاسخ‌های مرتبط با سیستم ایمنی در سلول‌های عروقی ممکن است شامل افزایش بیان مولکول‌های چسبان، رولینگ و نفوذ لکوسیت باشد. بررسی وقایع سلولی و مولکولی درگیر در فرآیند رولینگ برای درمان یا پیشگیری تنگی عروق به‌ویژه در شریان‌های کرونری مفید است. miRNAها، RNA‌های غیر‌کدکننده کوچک تک‌رشته‌ای با حدود ۲۳-۱۹ نوکلئوتید می‌باشند. هدف این مطالعه بررسی تاثیر سرکوب microRNA-125 بر چسبندگی سلولی در فرآیند رولینگ به‌منظور کاهش یا مهار تنگی عروق در افراد مستعد بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی که از تیر تا دی ۱۳۹۶ در مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی دانشکده پیراپزشکی دانشگاه علوم پزشکی ایران انجام گرفت، نمونه‌های بافت آئورت از افراد سالمی که به هر دلیل دچار مرگ مغزی شده و مشمول اهدای قلب و سایر نسوج بودند، از بخش جراحی واحد فرآهم‌آوری اعضای پیوندی بیمارستان دکتر مسیح دانشوری تهیه و با رعایت شرایط کاملا استریل در کوتاه‌ترین زمان ممکن به مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی منتقل شد. سلول‌های اندوتلیال از آئورت با استفاده از کلاژناز و مونوسیت‌ها با استفاده از کیت RosetteSep Kit (StemCell Technologies, Vancouver, Canada)، از خون کامل جدا شدند. microRNA-125 با استفاده از نانو ذره Polyethylenimine (PEI) به درون سلول‌های اندوتلیال منتقل شدند. سطح بیان مولکول چسبان اینتگرین بتا ۲ (ITGB2) با روش Quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) و میزان چسبندگی سلول‌های اندوتلیال-مونوسیت با CytoSelect™ leukocyte-endothelium adhesion assay kit (Cell Biolabs, San Diego, CA, USA) ارزیابی شد. یافته‌ها: براساس نتایج سطح بیان ژن اینتگرین بتا ۲ (ITGB2) و چسبندگی سلول‌های اندوتلیال-مونوسیت تحت درمان با microRNA-125 در مقایسه با نمونه‌های کنترل به‌طور معناداری کاهش یافت (به‌ترتیب ۰/۰۰۸P= و ۰/۰۲P=) که در نتیجه منجر به کاهش یا تعدیل فرآیند رولینگ می‌شود. نتیجه‌گیری: نتایج این مطالعه نشان داد که microRNA-125 میزان بیان مولکول چسبان ITGB2 و چسبندگی سلول‌های اندوتلیال را به‌طور چشمگیری کاهش داد.</div> <div data-select-like-a-boss="1" style="text-align: justify;">Background: The immune-mediated responses in vascular cells may include the increased expression of endothelial adhesion molecules, leukocyte rolling and inﬁltration, cellular lipid dysregulation and vascular smooth muscle cells (VSMCs) differentiation. Investigating the cellular and molecular events involved in the rolling process is useful for treatment or prevention of the vessel stenosis especially in coronary arteries. MiRNAs are small and single-stranded noncoding RNAs with about 19-23 nucleotides. In this study, the role of microRNA-125 was predictably selected and experimentally investigated on the changes of expression level of adhesion molecule in endothelial cells isolated from human aorta and on the monocyte cells isolated from whole blood human with endothelial cells adhesion. The aim of this study was to determine the effect of miRNA-125 repression on cell adhesion in leukocyte rolling process to reduce or suppress artery stenosis in susceptible individuals. Methods: This experimental study was performed in Cellular-Molecular Research Center of Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran from July to December 2017. Normal aortic samples were prepared from subjects with brain death in Masih Daneshvari Hospital and under strictly sterile conditions, it was transferred as soon as possible. The endothelial cells were isolated from aorta of subjects with brain death using collagenase. The monocytes were isolated from whole blood. The microRNA-125 was transfected into ECs with use of polyethyleneimine (PEI). The expression level of adhesion molecule and monocyte recruitment were identified by quantitative reverse transcription polymerase chain reaction (qRT-PCR) technique and CytoSelect™ leukocyte-endothelium adhesion assay kit (Cell Biolabs, San Diego, CA, USA), respectively. Results: The results showed the microRNA-125 suppresses significantly integrin beta 2 (ITGB2) expression level (P=0.008). In addition, the monocyte-EC adhesion was shown in the aortic miRNA-treated endothelial cells. The adhesive rate between cells reduced significantly with microRNA-125 as compared with miR-synthetic (P=0.02). Thereby, there were the associations between the ITGB2 and miR-125a. Downregulation of ITGB2 may be reduced the adhesion of endothelial cells and moderating the process rolling. Conclusion: This study suggested that the suppression of leukocyte rolling process might be more due to the function of ITGB2. However, the functional effects of this miRNA should be directly investigated on the studied gene.</div> مولکول‌های سلول چسبان, سلول‌های اندوتلیال, microRNA-125 cell adhesion molecules, endothelial cells, microRNA-125 146 151 http://tumj.tums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-4060-2&slc_lang=other&sid=1 Adeleh Poursaleh عادله پورصالح adelepoursaleh@yahoo.com Yes Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine, Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران، تهران، ایران. Mohammad Najafi محمد نجفی No Department of Clinical Biochemistry, School of Medicine, Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran. گروه بیوشیمی بالینی، دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی ایران، تهران، ایران. Farahnaz Sadegh Beigee فرحناز صادق‌بیگی No Masih Daneshvari Hospital, Shahid Beheshti University of Medical Sciences, Tehran, Iran. بیمارستان مسیح دانشوری، دانشگاه علوم پزشکی شهید بهشتی، تهران، ایران.