دوره 69، شماره 2 - ( 2-1390 )
جلد 69 شماره 2 صفحات 82-75 |
برگشت به فهرست نسخه ها
Download citation:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
BibTeX | RIS | EndNote | Medlars | ProCite | Reference Manager | RefWorks
Send citation to:
M S, H K S, Z R T, S K, N S, M B. Designing and constructing an 100 bp DNA Ladder by combining PCR and enzyme digestion methods. Tehran Univ Med J 2011; 69 (2) :75-82
URL: http://tumj.tums.ac.ir/article-1-260-fa.html
URL: http://tumj.tums.ac.ir/article-1-260-fa.html
سعیدی جم مسعود، احمد شهرضا حسین خان، ریخته‌گران تهرانی زهرا، کریمی زارع سکینه، شباب نوشین، بهدانی مهدی. طراحی و ساخت DNA Ladder صد جفت بازی با روش تلفیقی PCR و هضم آنزیمی. مجله دانشکده پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی تهران. 1390; 69 (2) :75-82
مسعود سعیدی جم1 
، حسین خان احمد شهرضا* 2، زهرا ریخته‌گران تهرانی3 ، سکینه کریمی زارع4 ، نوشین شباب1 ، مهدی بهدانی5
، حسین خان احمد شهرضا* 2، زهرا ریخته‌گران تهرانی3 ، سکینه کریمی زارع4 ، نوشین شباب1 ، مهدی بهدانی5
1- گروه بیوتکنولوژی دانشگاه علوم پزشکی همدان
2- انستیتو پاستور ایران تهران ،hossein_khanahmad@yahoo.com
3- بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی همدان
4- ژنتیک مولکولی، انستیتو پاستور تهران
5- بیوتکنولوژی پزشکی انستیتو پاستور ایران بخش ژنتیک پرشکی
2- انستیتو پاستور ایران تهران ،
3- بیوتکنولوژی پزشکی دانشگاه علوم پزشکی همدان
4- ژنتیک مولکولی، انستیتو پاستور تهران
5- بیوتکنولوژی پزشکی انستیتو پاستور ایران بخش ژنتیک پرشکی
چکیده: (13227 مشاهده)
زمینه و هدف: مارکرهای DNA به‌عنوان یکی از ابزارهای بسیار ضروری در آزمایشگاه‌های بیولوژی مولکولی مطرح می‌باشند. از آن‌ها برای تخمین اندازه قطعات DNA مورد آزمایش، به‌واسطه مقایسه میزان حرکت الکتروفورتیک قطعه مجهول و مارکر پس از انجام الکتروفورز استفاده می‌گردد. امروزه روش‌های متنوعی برای تولید تجاری این مارکرها به‌کار گرفته می‌شوند. در این مطالعه روشی کارآمد برای تولید تجاری این محصول ارایه گردیده است.
روش بررسی: در این پژوهش برای دست‌یابی به قطعات با اندازه مورد نظر از تلفیق دو روش هضم آنزیمی و واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز بهره گرفته شد. در روند مبتنی بر هضم آنزیمی به طراحی و ساخت پلاسمیدهایی پرداخته شد که اندازه DNA تشکیل دهنده بدنه آن‌ها برابر با طول قطعه مورد نظر بوده و با خطی کردن پلاسمید، قطعه مربوطه تولید گردید و در روش PCR در Multiple Cloning Site MCS پلاسمید pTZ57R قطعاتی با طول‌های مورد نظر قرار داده شد و از آن‌ها به‌عنوان الگو برای تولید نهایی این قطعات در واکنش PCR استفاده گردید.
یافته‌ها: با استفاده از این استراتژی قطعات 2000 و 3000 جفت بازی به‌واسطه هضم آنزیمی پلاسمیدهایی با همین اندازه تولید شد و قطعات 100 تا 1500 جفت بازی، طی واکنش PCR و تنها با استفاده از یک جفت پرایمر جلوبر و معکوس مکمل بدنه پلاسمید در دو طرف Multiple cloning site پلاسمید pTZ57R حاصل گردید.
نتیجه‌گیری: مزیت این روش استفاده از یک جفت پرایمر برای تولید تمام قطعات با روش PCR و استفاده از آنزیم‌های ارزان قیمت در تهیه قطعات بزرگ می‌باشد.
روش بررسی: در این پژوهش برای دست‌یابی به قطعات با اندازه مورد نظر از تلفیق دو روش هضم آنزیمی و واکنش زنجیره‌ای پلی‌مراز بهره گرفته شد. در روند مبتنی بر هضم آنزیمی به طراحی و ساخت پلاسمیدهایی پرداخته شد که اندازه DNA تشکیل دهنده بدنه آن‌ها برابر با طول قطعه مورد نظر بوده و با خطی کردن پلاسمید، قطعه مربوطه تولید گردید و در روش PCR در Multiple Cloning Site MCS پلاسمید pTZ57R قطعاتی با طول‌های مورد نظر قرار داده شد و از آن‌ها به‌عنوان الگو برای تولید نهایی این قطعات در واکنش PCR استفاده گردید.
یافته‌ها: با استفاده از این استراتژی قطعات 2000 و 3000 جفت بازی به‌واسطه هضم آنزیمی پلاسمیدهایی با همین اندازه تولید شد و قطعات 100 تا 1500 جفت بازی، طی واکنش PCR و تنها با استفاده از یک جفت پرایمر جلوبر و معکوس مکمل بدنه پلاسمید در دو طرف Multiple cloning site پلاسمید pTZ57R حاصل گردید.
نتیجه‌گیری: مزیت این روش استفاده از یک جفت پرایمر برای تولید تمام قطعات با روش PCR و استفاده از آنزیم‌های ارزان قیمت در تهیه قطعات بزرگ می‌باشد.
ارسال پیام به نویسنده مسئول
| بازنشر اطلاعات | |
 |
این مقاله تحت شرایط Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 International License قابل بازنشر است. |
